При этом способность клеток крови регулировать свой объем и форму влияет на их функционирование, в частности, на фагоцитарную активность [3, с. 695]. Данный параметр у ядерных гемоцитов низших позвоночных, в том числе и у холоднокровных, изучен недостаточно. Необходимость такого рода исследований обусловлена как теоретическим (анализ и сравнительная оценка эволюционных механизмов приспособительных реакций организма к экстремальным факторам среды), так и практическим (выявление информативных критериев поэтапных нарушений на клеточном уровне, разработка эффективных мер повышения адаптационных возможностей организма) интересом [12, с. 40].
Целью работы было изучение фагоцитарной активности (ФА) ядерных эритроцитов и лейкоцитов у представителей холоднокровных в условиях умеренной гипотонии.
Материал и методы исследования
В работе использовали периферическую кровь лягушки озёрной (Rana ridibunda Pall.) (30 особей) и сазана (Cyprinus carpio) (30 особей). Животных предварительно наркотизировали эфиром. Забор крови проводили у лягушки из сердца, у сазана — из хвостовой вены. В качестве антикоагулянта использовали гепарин в количестве 10 ед./мл. Полученную кровь центрифугировали 4 мин. при 400 g. Собирали обогащенную лейкоцитами часть плазмы и лейкоцитарное кольцо. Отдельно смесь лейкоцитов и эритроцитов разбавляли умеренно гипотоническим раствором NaCl в соотношении 1:10 (0,3 % для лягушки и 0,4 % для сазана). Смесь гемоцитов с объектами фагоцитарной реакции (1:50) помещали в пробирки и инкубировали при комнатной температуре в течение 30 мин., встряхивая пробирку с гемоконцентратом через каждые 5 мин. В качестве объектов фагоцитоза использовали дрожжи (Saccaromyces cerevisiae), сенную палочку (Bacillus subtilis) и агломерированные частицы латекса диаметром 0,8 мкм [2, с. 122; 4, с. 27; 9, с. 58—59; 10, с. 20;11, с. 52; 15, с. 25]. По окончании инкубации делали мазки, фиксировали клетки спиртом, окрашивали азур-эозином и подсчитывали фагоцитарную активность гемоцитов [1, с. 30—32].
Полученный цифровой материал обрабатывали статистически с использованием персонального компьютера. При определении достоверности разницы между группами использовали аргумент Стъюдента. Результаты рассматривали как достоверные, начиная со значения р<0,05.
Результаты исследования и их обсуждение
В результате проведенных исследований установлено, что в условиях умеренной гипотонии фагоцитарная активность лейкоцитов Cyprinus carpio к Saccaromyces cerevisiae на 40 % выше по сравнению с эритроцитами (табл. 1).
Таблица 1.
Показатели фагоцитарной активности гемоцитовCyprinuscarpio, %
Примечание: здесь и в табл. 2: * — по сравнению с дрожжами,
» — по сравнению с сенной палочкой, ’ — ФА эритроцитов по сравнению с лейкоцитами по t-критерию Стьюдента (p≤0,05).
ФА красных клеток крови сазана к клеткам дрожжей и сенной палочке на 50 и 54 % выше, чем к частицам латекса. У лейкоцитов Cyprinus carpio фагоцитарная активность в отношении Saccaromyces cerevisiae и Bacillussubtilis на 58 и 30 % выше по сравнению с латексом. В свою очередь, поглотительная способность белых клеток крови сазана к дрожжам на 41 % выше по сравнению с сенной палочкой.
Показатели фагоцитарной активности лейкоцитовRanaridibundaPall. в отношении Saccaromyces cerevisiae, Bacillussubtilis и латекса на 51, 55 и 74 % выше, чем у эритроцитов (табл. 2).
Таблица 2.
Показатели фагоцитарной активности гемоцитовRanaridibunda, %
Красными клетками крови лягушки дрожжи и сенная палочка поглощаются на 62 и 52 % активнее, чем частицы латекса, белыми — на 28 и 17 % соответственно.
Более высокие показатели фагоцитарной активности лейкоцитов по сравнению с эритроцитами у подопытных животных, возможно, обусловлены функциональной ролью белых клеток крови. Известно, что лейкоциты в организме обеспечивают иммунный ответ [7, с. 102]. Кроме того, клетки данного пула обладают большим мембранным резервом, чем эритроциты [5, с. 25], что позволяет им быстрее реагировать на изменения осмолярности среды.
Более высокая ФА гемоцитов подопытных животных к Saccaromyces cerevisiae и Bacillussubtilis по сравнению с латексом может быть обусловлена присутствием на поверхности клеточной стенки дрожжей галактоманнана, зимозана и других белков, которые могут связываться с рецепторами мембран лейкоцитов [14, с. 47], а также наличием у Cyprinus carpio и Rana ridibunda Pall. видового иммунитета к сенной палочке, которая широко распространена в их естественной среде обитания [2, с. 125].
Список литературы:
Александров М.Т., Кудрявицкий А.И., Румянцева Е.Г., Климова Л.А., Ларская М.В. Метод вычисления абсолютных показателей фагоцитоза // Лабораторное дело. — 1988. — № 9. — С. 30—32.
Воробьев А.А., Кривошеник Ю.С., Быков А.С. и др. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии. — М.: Мастерство, 2001. — 221 с.
Галкин А.А. Локомоторные свойства нейтрофилов и механизмы регуляции их движения // Успехи современной биологии. — 1997. — Т. 117. — Вып. 6. — С. 690—703.
Глик Б., Пастернак Д. Молекулярная биотехнология. — М.: Мир, 2002. — 589 с.
Нужна помощь в написании статьи?
Мы - биржа профессиональных авторов (преподавателей и доцентов вузов). Пишем статьи РИНЦ, ВАК, Scopus. Помогаем в публикации. Правки вносим бесплатно.
Головко С.И., Фёдорова М.З., Чернявских С.Д. Мембранный резерв клеток крови позвоночных животных // Тез.докл. VI Сибирского Физиол. съезда. — Барнаул, 2008. — 25 с.
Дроздов А.А., Дроздова М. В. Заболевания крови. Полный справочник. — М.: 2008. — 327 с.
Йегер Л. Клиническая иммунология и аллергология. — М.: Медицина, 1990. — 264 с.
Маянский А.Н. Фагоцитоз: проблемы и перспективы // Вестник РАМН. — 1993. — № 4. — С. 52—55.
Потапова С.Г., Хрустиков В.С., Демидова Н.В., Козинец Г.И. Изучение поглотительной способности нейтрофилов крови с использованием инертных частиц латекса // Проблемы гематологии и переливания крови. Т. XXII. — 1977. — № 9. — С. 58—59.
Сиротин А.А. Практикум по микробиологии. Учеб.пособие. Белгород: Издательство БелГУ, 2004. — 78 с.
Учитель И.Я. Макрофаги в иммунитете. — М.: Медицина, 1978. — 200 с.
Федорова М.З. Реактивность лейкоцитов крови при различных функциональных нарушениях. — Москва-Ярославль, 2001. — 68 с.
Фримель Х., Брок Й. Основы иммунологии. Пер. с нем. — М.: Мир, 1986. — 254 с.
Черношей Д.А., Кирильчик Е.Ю., Канашкова Т.А. Распознавание в системе врожденного иммунитета: учеб.-метод. пособие. — Минск.: БГМУ, 2009. — 66 с.
Eeden S.F., Klut M.E., Walker B.A.M., Hogg J.C. The use of flow cytometry to measure neutrophil function // J. of Immun. Meth., 1999. — Vol. 232. — P. 23—43.
Prunesco P. Natural and Experimental Phagocitosis by Erythrocytes in Amfibians // Naturte New Biology, 1971. — P. 143—44.