ABSTRACT
The studies of antiradical and cytotoxic activities of extracts and essential oil of Artemisia tschernieviana Besser, anatomy structure of plant were done.
Ключевые слова: антирадикальная активность; цитотоксическая активность; DPPH; BHA; анатомическое строение; эфирное масло; хлороформный экстракт; этилацетатный экстракт; этанольный экстракт; хлороформно-этанольный экстракт; Artemisia tschernieviana Besser.
Keywords: antiradical activity; cytotoxic activity; DPPH; BHA; anatomical structure; essential oil; chloroform extract; ethyl acetate extract; ethanol extract; chloroform-ethanol extract; Artemisia tschernieviana Besser.
Artemisia L. — это род семейства Asteraceae Dumort, насчитывающий более 400 видов. Artemisia tschernieviana Besser (полынь Черняева) — полукустарничек, 50—100 см высотой; с длинными веточками, почти от основания ветвящимися. Листья черешковые, в очертании продолговато-яйцевидные, 2—6 см длиной и до 3 см шириной, гладкие, дважды перисто рассеченные. Цветочные корзинки широко-яйцевидные, до 4 мм шириной, немногочисленные, сидят на коротких ножках. Растет в пустынной зоне, на песках. Встречается в Прикаспии, Бузачи, на Мангышлаке. Общее распространение: Кавказ. Эндем Прикаспийского региона [5].
Ранее была изучена антиоксидантная и антигемолитическая активность полыни из Ирана [9], с помощью метода гидродистилляции получено эфирное масло, изучена его антимикробная активность и определены его основные компоненты [8, 12], получено эфирное масло с помощью микроволнового метода выделения “Solvent free” и определены его основные компоненты [6].
Нами проведено изучение антирадикальной и цитотоксической активности экстрактов и эфирного масла A. tschernieviana, а также проведено исследование анатомического строение данного эфиромасличного сырья.
Надземную часть сырья A. tschernieviana (листья и стебли) собирали в фазе бутонизации на берегу Каспийского моря 22—23 июля 2013 г. в Мангыстауской области, окр. г. Актау), высушивали и измельчали.
Для изучения антирадикальной активности получили несколько экстрактов A. tschernieviana Besser: хлороформный (Atsch-1), этилацетатный (Atsch-2), этанольный (Atsch-3). Экстракты получали следующим образом: на аппарате Сосклет измельченную надземную часть A. tschernieviana экстрагировали этилацетатом, хлороформом, со смесью хлороформа — этанола (соотношение 1:1) (Atsch-5) и этанолом. Затем полученные экстракты упаривали на роторном испарителе.
Эфирное масло (Atsch-4) получено методом гидродистилляции на аппарате Клевенджера.
Метод исследования. Для определения ингибирования 2,2-дифенил-1-пикрилгидразилрадикала (DPPH) к 0,1 мл спиртового раствора исследуемых растворов в диапазоне концентраций 0,1; 0,25; 0,5; 0,75 и 1,0 мг/мл добавляли 3 мл 6*10-5 М раствора радикала. Пробирки находились в штативе, завернутого в черный полиэтилен. После интенсивного перемешивания растворы оставались в темноте на 30 минут, далее измеряли оптические плотности при 520 нм. Значения величины антирадикальной активности (АРА) исследуемых объектов определяли по формуле:
АРА (%) = A0 – At / A0 *100,
где: A0 — оптическая плотность контрольного образца;
At — оптическая плотность рабочего образца.
Оптическую плотность исследуемых растворов зависимую от концентрации измеряли на спектрофотометре Cary 60 при длине волны 520 нм, оптические плотности представлены в таблице 1. Антирадикальную активность экстрактов и эфирного масла мы сравнивали с бутилгидроксианизолом (BHA) [11].
Таблица 1.
Изменение оптической плотности растворов в зависимости от концентрации
Нужна помощь в написании статьи?
Мы - биржа профессиональных авторов (преподавателей и доцентов вузов). Пишем статьи РИНЦ, ВАК, Scopus. Помогаем в публикации. Правки вносим бесплатно.
Значения антирадикальной активности экстрактов и эфирного масла, рассчитанные по формуле, приведены в таблице 2.
Таблица 2.
Антирадикальная активность (АРА %) веществ при разных концентрациях рабочих растворов
На основании проведенного эксперимента можно предположить, что эфирное масло растения А. tschernieviana Besser (Atsch-4) проявляет низкую антирадикальную активность во всех концентрациях. Среди экстрактов этого растения, АРА хлороформного экстракта (Atsch-1) составляет около 30 %, этилацетатный экстракт (Atsch-2) в концентрациях 0,25 и 0,5 мг/мл показал среднюю АРА, но в концентрации 1 мг/мл проявил низкую активность. Антирадикальная активность этанольного экстракта (Atsch-3) растения А. tschernieviana Besser при концентрации 0,1 мг/мл была равна 49,92 %, а в остальных случаях показал высокую активность приближенной АРА к веществу ВНА (рисунок 1).
Таким образом, исследуя антирадикальную активность эфирного масла и экстрактов Artemisia tschernieviana Besser установлено, что наименьшую АРА имеет эфирное масло, а наиболее высокий показатель проявляет этанольный экстракт. Дальнейшее исследование экстрактов в будущем, может привести к нахождению новых лечебных свойств A. tschernieviana Besser.
Рисунок 1. Динамика антирадикальной активности при изменении концентрации веществ
Также нами изучена цитотоксическая активность экстрактов и эфирного масла растения A. tschernieviana Besser.
Метод определения цитотоксической активности [7, 10]. Делительную воронку на 55 мл заполняли искусственной морской водой и добавляли 200 мг яиц Artemia salina. Выдерживали в течение 3-х дней при мягкой подаче воздуха пока рачки не вывелись из яиц. Одну сторону трубы покрывали алюминиевой фольгой, и 5 мин спустя, личинок, которые собирались на яркой стороне делительной воронки, вынимали пипеткой Пастера.
20—40 личинок помещали в 990 мл морской воды в каждой из 24 микроплошек. Подсчитывали мертвых личинок под микроскопом. Добавляли по 10 мл раствора диметилсульфоксида на 10 мг/мл образца. В качестве препарата сравнения использовали актиномицин Д или стауроспорин. Для отрицательного контроля добавляли только 10 мл диметилсульфоксида. После 24 ч инкубации и дальнейшем выдерживании микроплошки в течение 24 ч (для обеспечения неподвижности) посчитывали мертвые личинки под микроскопом. Образцы с высокой цитотоксической эффективностью (менее 5 % выживших личинок) проверяли снова с концентрациями 50, 10, 5 и 1 мг/мл.
Смертность P определяли по следующей формуле:
A — N — B
P = (————-) х 100
Z
A= количество мертвых личинок после 24 ч; N= количество мертвых личинок до проведения теста; B= среднее количество мертвых личинок в отрицательном контроле; Z= общее количество личинок.
Таблица 3.
Нужна помощь в написании статьи?
Мы - биржа профессиональных авторов (преподавателей и доцентов вузов). Пишем статьи РИНЦ, ВАК, Scopus. Помогаем в публикации. Правки вносим бесплатно.
Цитотоксическая активность разных экстрактов и эфирного масла растения A. tschernieviana