Одним из путей повышения эффективности лечения данной патологии является применение комплексных методов лечения, основанных на сочетании лазерного излучения с медикаментозным воздействием. Целью работы являлось исследование влияния низкоинтенсивного лазерного излучения инфракрасного и красного спектра на рост культуры лактобактерий, являющихся действующим началом пробиотического препарата «Диалакт» (УП «Диалек», РБ).
Введение. Болезни пародонта относятся к числу наиболее распространенных стоматологических заболеваний. Так, по данным эпидемиологических исследований, проведенных в Республике Беларусь в 2006 году, у пациентов возрастной группы 35—44 года болезни пародонта зарегистрированы в 92,5±1,3 % случаев. Взаимосвязь патологии пародонта с общим состоянием здоровья пациентов, установленная многочисленными научными исследованиями, обусловлена нарушениями метаболизма, гемодинамики, нейрорегуляции, иммунологического статуса, а также сдвигами микробиоценоза. Хроническая системная патология и заболевания пародонта способны оказывать друг на друга взаимоотягощающее влияние, при этом традиционные лечебные воздействия у таких пациентов зачастую оказываются недостаточно результативными [13]. Учитывая высокую частоту встречаемости системных заболеваний у пациентов с патологией пародонта, актуален поиск новых эффективных методов лечения с использованием средств, оказывающих комплексное воздействие на ткани пародонта.
Лазерная терапия, основанная на использовании низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ), относится к числу наиболее перспективных методов в современной физической медицине. Данный вид излучения в последнее время широко используется для лечения различных стоматологических заболеваний. Значительное влияние на результат воздействия НИЛИ оказывает длина волны, которая определяет глубину проникновения лазерного излучения. В лазерной терапии обычно применяется световое излучение в красном и ближнем инфракрасном спектральном диапазоне. Действие его на организм связано с поглощением лучей поверхностными слоями кожи и слизистых оболочек. Данное излучение обладает анальгезирующим, противовоспалительным действием, ликвидируют отек и гипоксию в тканях за счет улучшения микроциркуляции, стимулирует регенерацию путем стимуляции дифференцировки фибробластов. Под воздействием лазерного света на твердые ткани зуба усиливается метаболизм клеточных элементов пульпы. При облучении эмали происходят структурные изменения, способствующие увеличению содержания кальция и фосфора, уменьшающие кислотное растворение эмали (Myers M.L, 1991).
Такие параметры излучения генерируют лазерные аппараты производства РБ Снаг (0,81 мкм, 0,98 мкм, 1,06 мкм), Родник-1 (0,845—0,9 мкм, 0,67 мкм), Люзар-МП (0,82 мкм, 0,6 мкм), «Вектор -03; -04» (0,65 мкм), Матрикс-стоматолог (0,81 мкм, 0,633 мкм), Милта-Ф-5-01(0,85-0,95 мкм, 0,63 мкм), Узор-А-2К-Профи (0,86 мкм, 0,63 мкм), Шатл-комби (0,632 мкм, 0,87 мкм), Скаляр-панатрон (0,86 мкм, 0,63 мкм) , Латон (0,84 мкм, 0,65 мкм) , Лост-02 (0,65 мкм), Рефтон-01-ФЛС (0,65 мкм), которыми оснащены учреждения здравоохранения.
Одним их путей повышения эффективности лазерной терапии является применение комплексных методов лечения, основанных на сочетании лазерного излучения с медикаментозным лечением [16]. Поскольку ведущая роль в развитии болезней пародонта принадлежит микроорганизмам, целесообразно включение в схему лечения препаратов, оказывающих воздействие на патогенную микрофлору.
В настоящее время перспективным направлением в медицине является использование пробиотиков — лекарственных препаратов, которые содержат в составе живые микроорганизмы, являющиеся представителями нормальной микрофлоры человека. Постоянная микрофлора полости рта служит биологическим барьером, препятствующим размножению патогенной флоры. Среди представителей нормального микробиоценоза полости рта наибольшее физиологическое значение принадлежит роду Lactobacillus. Лактобациллы – микроаэрофильные, грамположительные бактерии, не образующие спор и не продуцирующие каталазу. Они входят в состав резидентной микрофлоры полости рта. Их количественное содержание в полости рта здоровых людей составляет 10³—104 КОЕ/мл [2]. Антагонизм молочнокислых бактерий в отношении микроорганизмов обусловлен образованием молочной кислоты, продукцией других антимикробных и антибиотикоподобных субстанций: лизоцима, перекиси водорода, бактериоцинов (лактацинов), короткоцепочечных жирных кислот, диацетила [2, 6, 15], а также конкуренцией за рецепторы для адгезинов на поверхности клеток макроорганизма. Пробиотики, содержащие лактобактерии, также оказывают иммуностимулирующее действие, не имеют побочных эффектов и противопоказаний при местном использовании [3, 4]. Учитывая различные патогенетические механизмы влияния НИЛИ и пробиотика, представляется перспективным использование их сочетанного воздействия при лечении заболеваний пародонта. Выбор препарата, содержащего лактобактерии, обусловлен также их более эффективным восстановлением нормальной микрофлоры при пародонтитах по сравнению с бифидумбактериями [3].
Однако вопросы взаимодействия живых культур пробиотиков с лазерным излучением, широко применяемым в стоматологической практике, требуют тщательного изучения. В литературе имеются весьма противоречивые сведения, касающиеся оценки воздействия низкоинтенсивного лазера на живые микроорганизмы [11, 14]. Некоторые авторы утверждают, что НИЛИ не оказывает выраженного непосредственного бактерицидного или бактериостатического действия на микробную клетку. В других исследованиях отмечают положительное влияние НИЛИ на рост некоторых микроорганизмов [10].
Выбор оптимальных длин волн излучения (в том числе не совпадающих с традиционно используемыми), с точки зрения отсутствия угнетающего воздействия на рост лактобактерий, входящих в состав пробиотика, представляет актуальную практическую задачу.
Целью работы являлось исследование влияния низкоинтенсивного красного и инфракрасного лазерного излучения спектральных областей ~ 0,65 мкм, ~ 0,81 мкм, ~ 1,3 мкм и ~ 2 мкм в дозе облучения 0,6 Дж/см2 на рост культуры лактобактерий, входящих в качестве основного действующего начала в состав отечественного пробиотического препарата «Диалакт» (УП «Диалек», Республика Беларусь).
Материалы и методы. В качестве излучателей использовались: лазерные диоды (номинальная длина волны излучения в максимуме — 0,65 мкм (аппарат «Вектор -03» (УП Азгар, РБ) и 0,806 мкм при температуре 25 0С (производитель — «ATC», C.-Петербург, Россия), диодно-накачиваемый неодимовый лазер, генерирующий в канале ~ 1,3 мкм и диодно-накачиваемый тулиевый лазер (экспериментальный образец, длина волны излучения в максимуме — 1,96 мкм, ширина спектра ~ 10 нм), генерирующие в непрерывном режиме. Излучение лазеров выводилось в кварцевый оптический световод с диаметром ядра 600 мкм, стыкующийся со специальной насадкой, обеспечивающей сглаженное распределение интенсивности выходного излучения на площади ~1 см2. Облучение бактериальных культур проводилось при плотности мощности излучения 15 мВт/см2, время воздействия составляло 40 с, что соответствовало дозе 0,6 Дж/см2. Данные параметры облучения были разработаны на кафедре терапевтической стоматологии БелМАПО в рамках государственной научно-технической программы по теме «Разработать хирургический метод лечения заболеваний тканей пародонта и апикального периодонта с использованием препарата гидроксиапатита и низкоинтенсивного лазера» [8, 9].
В качестве лекарственного средства нами был использован препарат «Диалакт» производства Республики Беларусь. Действующее начало «Диалакта» представляет собой лиофилизированную микробную массу живого антагонистически активного штамма лактобактерий (Lactobacillus acidophilus Ke-10). В одной дозе препарата содержится не менее 108 живых особей лактобацилл. Вспомогательными компонентами являются цитрат натрия (0,15 %), молоко сухое обезжиренное (до 15 %). Сухой препарат «Диалакт» готовили к применению согласно инструкции фирмы-производителя, после чего получали разведения -2 (107), -3 (106) и -4 (105), в которых наблюдали изолированный рост колоний лактобактерий. Подготовленный препарат объемом 0,1 мл равномерно наносили на селективную питательную среду Рогоза-Шарпа-Мана, предварительно разлитую в чашки Петри. Облучение культуры лактобактерий производили через отверстие площадью ~1 см2 специального стерильного шаблона, после чего чашки Петри устанавливали в эксикатор и помещали в термостат на 48 часов при температуре 370С. Подсчет числа выросших колоний производили на третьи сутки. При этом общую площадь чашки Петри условно делили на 4 равных сегмента, два из которых подвергали облучению. Подсчет количества колоний в этих сегментах позволял оценить влияние НИЛИ на жизнедеятельность лактобактерий. Число колоний в двух других сегментах, не подвергавшихся облучению, составляло контрольное значение. В ходе эксперимента было изучено 612 образцов. Данные о количестве и структуре исследования представлены в таблице 1.
Таблица 1
Количество микробиологических исследований
Статистическая обработка экспериментальных данных производилась с использованием программного пакета «Статистика 8». Различия считались достоверными при уровне значимости p<0,05.
Результаты.
Полученные результаты представлены в табл. 2—5.
Нужна помощь в написании статьи?
Мы - биржа профессиональных авторов (преподавателей и доцентов вузов). Пишем статьи РИНЦ, ВАК, Scopus. Помогаем в публикации. Правки вносим бесплатно.
Таблица 2
Количество колоний лактобактерий после воздействия НИЛИ с длиной волны 0,65 мкм
Статистическая обработка экспериментальных данных показала, что при облучении культуры лактобактерий НИЛИ с длиной волны 0,65 мкм в разведении –2 количество колоний лактобактерий в опыте по сравнению с контролем возросло, однако увеличение оказалось статистически недостоверным. При изучении влияния этой длины волны на культуру в разведении –3 полученные данные достоверно различались (78 [19;248] и 69,5 [13;273,5] соответственно), а при облучении культуры в разведении –4 количество колоний по сравнению с контролем возросло в 1,3 раза.
Таблица 3
Количество колоний лактобактерий после воздействия НИЛИ с длиной волны 0,81 мкм