Коферменты амино­трансферазы — пиридоксальфосфат и пиридоксаминофосфат. Аминотрансферазы участвуют в азотистом обмене, особенно в обмене аминокислот. Определение аланиновой и аспарагиновой аминотрансфе­раз в сыворотке крови человека используют в диагностике заболеваний печени и сердца.

Наибольшее клинико-диагностическое значение имеет определение активности двух аминотрансфераз: аспартатаминотрансфе­разы (АСТ) и аланинаминотрансферазы (АЛТ). Аспартатаминотрансфе­раза широко распространена в органах и тканях человека. Наибольшее содержание АСТ обнаружено в сердечной мышце, затем последо­вательно в убывающем количестве в печени, скелетной мускулатуре, головном мозге, почках, семенниках. Активность АСТ в сердечной мышце почти в 10000 раз выше, чем в сыворотке. В эритроцитах АСТ содержится в 10 раз больше, чем в сыворотке. Поэтому при определении аминотрансфераз в сыворотке крови последняя не должна иметь даже следов гемолиза.

Внимание!

Если вам нужна помощь с работой, то рекомендуем обратиться к профессионалам. Более 70 000 экспертов готовы помочь вам прямо сейчас.

Подробнее Гарантии Отзывы

Фермент, катализирующий обратимый перенос аминогруппы с аланина на α-кетоглутаровую кислоту, получил название аланинамино­трансферазы. Наиболее высокая активность АЛТ обнаруживается в пе­чени, поджелудочной железе, сердце и скелетной мускулатуре. В печени активность АЛТ в несколько тысяч раз выше, чем в сыворотке крови.

Повышение активности аминотрансфераз в сыворотке крови отмечено при целом ряде заболеваний и особенно при поражении органов и тканей, богатых данными ферментами (печень, миокард и др.). Наиболее резкие изменения в активности АСТ наблюдаются при поражении сердечной мышцы.

Повышение активности АСТ в сыворотке крови больных инфарктом миокарда наблюдается в 93—98 % случаев. Увеличение активности начинается обычно через 6—12 часов после возникновения инфаркта миокарда, достигает максимума через 24—48 часов, затем постепенно падает, возвращаясь к нормальному уровню чрез 4—5 дней. При инфаркте миокарда активность АСТ в сыворотке крови может увеличиваться в 2—20 раз.

Считают, что существует тесная корреляция между размерами очага некроза и активностью АСТ в сыворотке крови. Как показали исследования ряда авторов, некроз площадью 1,5х1,5 см приводит к значительному подъему АСТ в сыворотке крови.

При заболеваниях печени в первую очередь и наиболее значи­тельно по сравнению с АСТ изменяется активность АЛТ. Установлено, что повреждение всего лишь одной печеночной дольки достаточно для значительного увеличения активности сывороточной АЛТ.

Скидка 100 рублей на первый заказ!

Акция для новых клиентов! Разместите заказ или сделайте расчет стоимости и получите 100 рублей. Деньги будут зачислены на счет в личном кабинете.

Подробнее Гарантии Отзывы

Особенно резко повышается активность АЛТ в сыворотке крови при инфекционном гепатите. Максимум повышения активности фермента отмечается на 6—10 день заболевания и постепенно возвра­щается к норме к 15—20 дню. Активность АЛТ увеличивается уже в инкубационном периоде заболевания, что имеет большое диагностическое значение [2].

Выбор аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотранс­феразы (АсАТ) в качестве индикаторов влияния гепарина на токсические свойства был обусловлен тем, что эти два фермента являются информативным клиническим тестом при заболеваниях сердца и печени. Хорошо известно, что этанол и пчелиный яд обладают ярко выраженным кардиотропным и гепатотропным действием, а значит можно гипотетически полагать, что он будет влиять на активность данных ферментов. С другой стороны, печень является одним из основных депо эндогенного гепарина, который, возможно также влияет на активность АлАТ и АсАТ.

Работа была выполнена на 92 лабораторных крысах-самцах, содержащихся на общем рационе вивария. Определение активности ферментов в периферической крови осуществлялось общепринятыми методами.

Статистическая обработка экспериментальных данных была выполнена с помощью программы «Биостат». Для сравнения нескольких групп использовали однофакторный дисперсионный анализ и критерий Стьюдента для множественных сравнений [1].

В нашей работе после введения пчелиного яда наблюдалось повышение уровня активности аминотрансфераз в периферической крови крыс. Активность аланинаминотрансферазы, определенная по прошествии 1 часа от введения пчелиного яда в дозе 2 мг/кг повыси­лась в 3 раза по сравнению с контролем. Через 6 часов после введения яда активность фермента снижалась до уровня, статистически не отличающегося от контроля (рис. 1).

Введение гепарина (50 МЕ/кг) способствовало понижению активности фермента. Достоверные различия от контрольных величин были выявлены и через 1 час, и через 6 часов после введения. Необходимо отметить, что к 6 часам от введения наблюдается тенденция к увеличению активности фермента (рис. 1). К этому времени происходит нейтрализация гепарина вследствие расщепления гепариназой и образования комплексов с серотонином и белками плазмы крови [3].

Смесь пчелиного яда (2 мг/кг) с гепарином (50 МЕ/кг) вызывала достоверное увеличение активности АлАТ до уровня 0,340±0,045 и 0,258±0,052 мкмоль ПВК/ч мл через 1 час и 6 часов от введения соответственно (рис. 1).

Закажите работу от 200 рублей

Если вам нужна помощь с работой, то рекомендуем обратиться к профессионалам. Более 70 000 экспертов готовы помочь вам прямо сейчас.

Подробнее Гарантии Отзывы

При введении следующим двум группам пчелиного яда (2 мг/кг) на фоне гепарина (50 и 500 МЕ соответственно) также наблюдалось достоверное увеличение активности АлАТ через 1 час и 6 часов от введения. Более высокая активность фермента проявилась через 1 час после применения пчелиного яда на фоне 500 МЕ/кг гепарина. В этой же группе наблюдалось более интенсивное падение активности трансферазы через 6 часов после введения (рис. 1).

1 — Контроль (интактные)

2 — Контроль (физиологический раствор)

3 — Пчелиный яд (2 мг/кг)

4 — Гепарин (50 МЕ/кг)

5 — Пчелиный яд (2 мг/кг)+гепарин (50 МЕ/кг)

6 — Пчелиный яд (2 мг/кг) на фоне гепарина (50 МЕ/кг)

7 — Пчелиный яд (2 мг/кг) на фоне гепарина (500 МЕ/кг)

8 — Протамин сульфат (10 мг/кг)

9 — Пчелиный яд (2 мг/кг) на фоне протамин сульфата (10 мг/кг)

* — Различия между контрольными и экспериментальными группами статистически значимы (р≤0,05)

Нейтрализация эндогенного гепарина протамин сульфатом в количестве 10 мг/кг вызывала не слишком значительное, но статистически достоверное повышение активности АлАТ, в то время как введение пчелиного яда (2 мг/кг) на фоне протамин сульфата вызывало увеличение уровня фермента более чем в 3,5 раза.

Активность аспартатаминотрансферазы, измеренная через 1 час после воздействия пчелиного яда (2 мг/кг) была в 1,6 раза выше контрольной. Через 6 часов от введения яда не наблюдалось статистически значимых отличий от контроля (рис. 2).

Введение гепарина (50 МЕ/кг) способствовало снижению активности фермента через 1 час с последующим повышением через 6 часов после введения.

Введение смеси пчелиный яд (2 мг/кг) — гепарин (50 МЕ/кг) приводило к статистически значимому повышению уровня фермента, причем через 6 часов после введения не отмечалось тенденции к нормализации активности.

Закажите работу от 200 рублей

Если вам нужна помощь с работой, то рекомендуем обратиться к профессионалам. Более 70 000 экспертов готовы помочь вам прямо сейчас.

Подробнее Гарантии Отзывы

При введении пчелиного яда (2 мг/кг) на фоне предварительной гепаринизации (500 МЕ/кг) также наблюдалось увеличение активности АсАТ, однако через 6 часов после введения яда не наблюдалось статистически значимых отличий от контроля.

Антагонист гепарина протамин сульфат вызывал достоверное, с течением времени мало снижающееся повышение уровня АсАТ. Пчелиный яд (2 мг/кг) на фоне протамин сульфата (10 мг/кг) вызывал резкое возрастание активности АсАТ в 5,5 раз с последующим снижением до 1,018±0,073 мкмоль ПВК/ч мл через 6 часов от введения (рис. 2).

Пчелиный яд при введении в организм млекопитающих вызывает тяжелые нарушения обмена веществ. Это связано с прямым его действием на ферментные системы, а также со способностью нарушать нервную и гуморальную регуляцию обмена и вызывать состояние стресса. Установлено, что любые стрессовые состояния, требующие срочной мобилизации компонентов белка для покрытия энергетических нужд организма, связаны с адаптивным, гормонально-стимулируемым биосинтезом определенных аминотрансфераз, участвующих в глюконеогенезе (аланин- и аспартат-аминотрансфераз, аминотрансфераз ароматических аминокислот).

1— Контроль (интактные)

2— Контроль (физиологический раствор)

3— Пчелиный яд (2 мг/кг)

4— Гепарин (50 МЕ/кг)

5— Пчелиный яд (2 мг/кг)+гепарин (50 МЕ/кг)

6— Пчелиный яд (2 мг/кг) на фоне гепарина (50 МЕ/кг)

7— Пчелиный яд (2 мг/кг) на фоне гепарина (500 МЕ/кг)

8— Протамин сульфат (10 мг/кг)

9— Пчелиный яд (2 мг/кг) на фоне протамин сульфата (10 мг/кг)

* — Различия между контрольными и экспериментальными группами статистически значимы (р≤ 0,05)

Скидка 100 рублей на первый заказ!

Акция для новых клиентов! Разместите заказ или сделайте расчет стоимости и получите 100 рублей. Деньги будут зачислены на счет в личном кабинете.

Подробнее Гарантии Отзывы

Повышение активности аминотрансфераз можно объяснить и воздействием компонентов апитоксина непосредственно на мембраны клеток. Известно, что мелиттин — мембранолитик, поэтому он изменяет проницаемость мембраны [7] и таким путем может влиять на локализацию и активность ферментов.

Сам гепарин снижает развитие общего адаптационного синдрома [8]. Предполагается, что гепарин влияет на конститутивный или индуктивный синтез трансаминаз в печени или других органах и тканях, а также образует биокомплекс гепарин + трансаминазы, обеспечивая восстановление нарушенных реакций переаминирования [5]. Кроме того, возможна непосредственная нейтрализация токсичных компонентов яда образованием неактивных комплексных соединений с гепарином [6]. Этим объясняется меньшая токсичность пчелиного яда в составе смеси по сравнению с введением на фоне предварительной гепаринизации.

В следующей серии экспериментов исследовалось изменение активности аминотрансфераз при действии этанола, гепарина и протамин асульфата. У интактных животных активность АлАТ и АсАТ равна 0,156±0,064 и 0,103±0,025 мкМ/мл соответственно. Введение физиологического раствора в объёме 1 мл многократно снижает активность АлАТ (0,061±0,030) и более чем в два раза снижает активность АсАТ (0,051±0,013) относительно интактных животных. В связи с тем, что исследуемые вещества мы разводили в физиологическом растворе, в качестве контроля для статистической обработки были взяты именно эти данные (рис. 3).

При введении гепарина в дозах от 1000 МЕ/кг до 5000 МЕ/кг активность АлАТ повышается и достигает при введении гепарина 5000 МЕ/кг 0,405±0,048 мкМ/мл. При оценке активности АсАТ установлено, что его активность возрастает в тех же пределах, за исключением введения гепарина в дозе 5000 МЕ/кг (0,081±0,065 мкМ/мл) (рис. 4).

Этанол (12 %, 0,5 мл/200г) повышает активность АлАТ и АсАТ, однако 20 % этанол объёме 0,5 мл/200г снижает активность АлАТ до 0,185±0,022 мкМ/мл, АсАТ — до 0,022±0,017 мкМм/л, сравнимых с контрольными величинами.

1. Интактная группа; 2. Контроль (физ.раствор);

3. Гепарин (500 МЕ/кг); 4. Гепарин (1000 МЕ/кг);

5. Гепарин (2500 МЕ/кг); 6. Гепарин (3000 МЕ/кг);

7. Гепарин (5000 МЕ/кг); 8. Этанол (12 %, 0,5 мл/200г);

9. Этанол (20 %, 0,5 мл/200г); 10. Гепарин(500 МЕ/кг)→ Этанол(12 %); 11. Гепарин(1000 МЕ/кг) →Этанол(12%, 0,5 мл/200г);

12. Гепарин (2500 МЕ/кг) →Этанол(12%, 0,5 мл/200г)

13. Гепарин(2500 МЕ/кг) → Этанол(20%, 0,5 мл/200г)

14. Гепарин(2500 МЕ/кг) + Этанол(20%, 0,5 мл/200г)

15. Гепарин (5000 МЕ/кг) → Этанол(12%, 0,5 мл/200г)

16. Этанол (12 %, 0,5 мл/200г)→ Гепарин(500 МЕ/кг)

17. Этанол(12 %, 0,5 мл/200г) → Гепарин(2500 МЕ/кг)

18. Протамин сульфат(1 мг/кг) → Этанол (12 %,0,5 мл/200г)

* Различия между контрольными и экспериментальными группами статически значимы (p<0.05)

Скидка 100 рублей на первый заказ!

Акция для новых клиентов! Разместите заказ или сделайте расчет стоимости и получите 100 рублей. Деньги будут зачислены на счет в личном кабинете.

Подробнее Гарантии Отзывы

Совместное применение гепарина и этанола в различных вариантах введения не выявило каких-либо общих закономерностей и тенденций влияния на активность АлАТ и АсАТ. Правда, следует отметить, что этанол(12 %, 0,5 мл/200г) на фоне предварительного введения гепарина (1000 МЕ/кг) увеличивает активность АлАТ до 0,257±0,021 мкМ/мл, а активность АсАТ — до 0,558±0,205 мкМ/мл. Аналогичное повышение активности АсАТ регистрировалось при введении гепарина (2500 МЕ/кг) и этанола (20 %, 0,5 мл/200г) в виде смеси (рис. 4).

1. Интактная группа; 2. Контроль (физ.раствор);

3. Гепарин (500 МЕ/кг); 4. Гепарин (1000 МЕ/кг);

5. Гепарин (2500 МЕ/кг); 6. Гепарин (3000 МЕ/кг);

7. Гепарин (5000 МЕ/кг); 8. Этанол (12 %, 0,5 мл/200 г);

9. Этанол (20 %, 0,5 мл/200г); 10. Гепарин(500 МЕ/кг)→ Этанол(12 %); 11. Гепарин(1000 МЕ/кг) →Этанол(12%, 0,5 мл/200г);

12. Гепарин (2500 МЕ/кг) →Этанол(12%, 0,5 мл/200г)

13. Гепарин(2500 МЕ/кг) → Этанол(20%, 0,5 мл/200г)

14. Гепарин(2500 МЕ/кг) + Этанол(20%, 0,5 мл/200г)

15. Гепарин (5000 МЕ/кг) → Этанол(12%, 0,5 мл/200г)

16. Этанол (12 %, 0,5 мл/200 г)→ Гепарин(500 МЕ/кг)

17. Этанол(12 %, 0,5 мл/200 г) → Гепарин(2500 МЕ/кг)

18. Протамин сульфат(1 мг/кг) → Этанол (12 %,0,5 мл/200 г)

* Различия между контрольными и экспериментальными группами статически значимы (p<0.05)

Таким образом, 12 % этанол в объеме 0,5 мл/200 г достоверно повышает активность АлАТ и АсАТ. При использовании 20 % спирта в том же объёме активность АлАТ остаётся достоверно высокой, а активность АсАТ резко уменьшается и достоверно не отличается от контрольных величин.

Гепарин повышает активность АлАТ и АсАТ, однако следует сказать, что активность АсАТ при введении высокой дозы (5000 МЕ/кг) гепарина резко снижается. Гепарин, вероятно, воздействует на состояние дисферментемии применительно к АсАТ, что, возможно, связано с влиянием гепарина на конститутивный или индуктивный синтез АсАТ в печени или других органах и тканях, а также с образованием биокомплекса гепарин + трансаминазы [5].

Известно, что гепарин образует с этанолом нестойкие соединения, распадающиеся при небольшом изменении условий, особенно in vivo. Видимо поэтому активность трансаминаз при различных сочетаниях введения этанола с гепарином не даёт четкой картины протекторного действия гепарина в отношении этанола, какую мы наблюдаем при оценке влияния протеогликана на продолжительность этанолового сна [4].

Список литературы:

Гланц Стентон. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. — М.: Практика, 1999. — 459 с.

Нужна работа? Есть решение!

Более 70 000 экспертов: преподавателей и доцентов вузов готовы помочь вам в написании работы прямо сейчас.

Подробнее Гарантии Отзывы

Комаров Ф.И., Коровкин Б.Ф., Меньшиков В.В. Биохимические исследования в клинике.- Элиста: АПП «Джангар», 2001. — 216 с.

Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния крови и ее свертывания. М.: Медицина, 1975. — 488 с.

Пурсанов К.А., Хомутов А.Е., Бутылин А.Г., Слободянюк В.С. Влияние гепарина, протамин сульфата, этанола и их сочетанного применения на показатели сна экспериментальных животных // Медицинский альманах, 2009. № 3(8). С. 136—137.

Федянин Ю.П., Патеюк В.Г. Влияние гепарина на некоторые ферменты переаминирования в сыворотке крови больных эпидемическим гепатитом // Гепарин. Физиология, биохимия, фармакология и клиническое применение. Тезисы III Всесоюзной конференции. М., 1973. — С. 312—314.

Хомутов А.Е., Орлов Б.Н. Физиологическая роль гепарина. Горький: Изд-во ГГУ, 1987. — 77 с.

Хомутов А.Е., Пурсанов К.А., Калашникова Л.М. Пчелы, пчелиный яд, апитоксинотерапия. — Н. Новгород: Изд-во НГМА, 2006. — 380 с.

Jaques L.B. Physiology of heparin// Angeologie. 1983. V. 35, № 5. — P. 145—154.