Не отобразилась форма расчета стоимости? Переходи по ссылке

Не отобразилась форма расчета стоимости? Переходи по ссылке

Научная статья на тему «Отработка условий пробоподготовки для определения левомицетина в мясных продуктах»

АННОТАЦИЯ. В статье представлены результаты исследований по выбору оптимальных условий пробоподготовки для определения левомицетина (хлорамфеникола) в мясе методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием. Изучена эффективность извлечения хлорамфеникола из мяса методами жидкостной и твердофазной экстракции. Установлено, что максимальная степень извлечения составляет 99,98 % и достигнута при использовании в качестве пробоподготовки жидкостной экстракции.

Помощь в написании статьи

ABSTRACT

This article describes analysis results of sample preparation conditions for determination of chloramphenicol residue in meat by LC/MS/MS method. Efficiency of extraction of chloramphenicol from meat is studied by methods of liquid and solid-phase extraction. The maximum extent of extraction is about 99,98 %. It is reached by using liquid extraction for sample preparation.

Ключевые слова: хлорамфеникол; мясо; жидкостная экстракция; твердофазная экстракция; высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-спектрометрическим детектированием.

Keywords: cloramphenicol; meat; liquid extraction; solid-phase extraction; liquid chromatography mass spectrometry.

Одной из задач современной аналитической химии является разработка селективных и высокочувствительных методик определения контаминантов в продуктах питания с целью оценки их влияния на здоровье населения. К числу загрязнителей пищевой продукции относятся ветеринарные препараты, в частности хлорамфеникол (левомицетин), представитель группы ароматических антибиотиков, широко используемый в ветеринарной практике для борьбы с инфекционными заболеваниями. Хлорамфеникол медленно выводится из организма животных и относительно долго сохраняет активность при хранении продуктов. При употреблении продуктов с остаточным содержанием хлорамфеникола в организме человека вырабатывается резистентность к антибиотику, может развиваться дисбактериоз, аллергические реакции, снижается иммунитет. В соответствии с СанПиН 2.3.2.1078-01 «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов допустимый уровень остаточного содержания хлорамфеникола в продукции составляет 0,0003 мг/кг.

При разработке методики проведения анализа контаминантов в пищевых продуктах важное место занимает пробоподготовка, целью которой является наиболее полное извлечение следовых количеств аналита и эффективная очистка от компонентов биологической матрицы.

В статье представлены результаты исследований по выбору оптимальных условий пробоподготовки в ходе разработки методики определения левомицетина в мясных продуктах.

Экспериментальные исследования по отработке условий проводились на жидкостном хроматографе Agilent 1200 в сочетании с масс-спектрометрическим детектором с тройным квадруполем LC/MS 6460 Agilent Technologies в отработанных условиях выполнения анализа.

При выборе оптимальных условий подготовки проб к анализу для получения более точных результатов при проведении количественного анализа органических соединений необходимо учитывать влияние матричного эффекта, степень извлечения и погрешность подготовки проб к анализу, так как они могут в значительной степени повлиять на конечные результаты измерений [1]. С этой целью проведено сравнение эффективности экстракции антибиотика из образцов мясного фарша с использованием различных способов пробоподготовки.

В ходе проделанной работы был исследованы 2 варианта пробоподготовки с использованием метода твердофазной экстракции с насыпными сорбентами. Пробоподготовка основана на методе “QuEChERS”, используемом для определения пестицидов и других контаминантов в продуктах питания.

В первом варианте к 10 г мясного фарша, с заданным содержанием левомицетина, добавляли 20 см3 ацетонитрила и соли, в основном MgSO4 и NaCl, используемые в качестве высаливателей.

Смесь интенсивно встряхивали, центрифугировали при скорости вращения 3000 об/мин. Надосадочный слой отбирали в чистую пробирку объемом 50 см3 и чистили путем добавления в пробирку с экстрактом сорбента и соли MgSO4, интенсивно перемешивали в течение 1 минуты. Смесь центрифугировали в течение 1 мин со скоростью 3000 об/мин, верхний слой переносили в чистую пробирку, высушивали в токе воздуха при нагревании. Сухой остаток перерастворяли в 1 см3 смеси ацетонитрил:вода (1:1), фильтровали через капроновый фильтр с диаметром пор 0,2 мкм и анализировали аликвоту объемом 10 мм3 методом ВЭЖХ/МС.

Для расчета степени экстракции использовали характеристики, полученные для основного иона: площадь (S 321->152) и отношение сигнал/шум (SNR 321->152). Степень экстракции левомицетина составила 33 %.

В отличие от 1-го (безводного) варианта, исключающего присутствие воды, во 2-ом варианте экстракция протекала в водной среде. 2г мясного фарша, с заданным содержанием левомицетина, помещали в центрифужную пробирку вместимостью 50 см3, к образцу добавляли дистиллированную воду (8—10 см3). Смесь интенсивно встряхивали в течение 1 минуты, добавляли 10 см3 1 %-го раствора уксусной кислоты в ацетонитриле, интенсивно встряхивали в течение 5 минут, добавляли набор для ТФЭ с насыпным сорбентом для анализа мясных и молочных продуктов, встряхивали в течение 1 минуты и центрифугировали при скорости вращения 4000 об/мин. Надосадочный слой отбирали в чистую пробирку объемом 15 см3, содержащую сорбент для очистки экстракта, интенсивно встряхивали в течение 2 минут, центрифугировали при скорости вращения 4000 об/мин. Верхний слой растворителя переносили в новую пробирку, высушивали в токе воздуха при температуре 40 оС, перерастворяли в 0,8 см3 раствора метанол/вода/0,1 % уксусная кислота. Экстракт фильтровали через капроновый фильтр и анализировали в количестве 10 мм3 методом ВЭЖХ/МС. Степень экстракции хлорамфеникола из образцов мяса составляет 41,0 %.

Наиболее широко используемым приемом извлечения анализируемых веществ из биологических сред, в том числе продуктов питания, является экстракция [2]. Изучена эффективность извлечения левомицетина из мяса методом жидкостной экстракции с использованием в качестве экстрагента этилацетата. Процедура пробоподготовки заключалась в двойной экстракции 10 г мясного фарша, с заданным содержанием левомицетина, этилацетатом. Объединенные экстракты высушивали в токе воздуха на водяной бане до образования остатка в виде маслянистой капли. К остатку добавляли 2 см3 метанола, 25 см3 4 %-ного водного раствора хлорида натрия и 20 см3 гексана. Содержимое пробирки интенсивно встряхивали и центрифугировали в течение 5 мин со скоростью 3000 об/мин. Верхний (гексановый) слой отбрасывали и проводили повторную очистку гексаном. К оставшемуся раствору добавляли 15 см3 этилацетата, тщательно перемешивали, центрифугировали со скоростью 3000 об/мин. Верхний слой (слой этилацетата) переносили в чистую пробирку, проводили повторную жидкостную экстракцию этилацетатом. Объединенный экстракт высушивали досуха на водяной бане при температуре 45 оС. Остаток растворяли в 1 см3 смеси метанол:вода=1:1, фильтровали через капроновый фильтр и анализировали аликвоту объемом 10 мм3 методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с масс-спектрометрическим детектированием (ВЭЖХ/МС).

Степень экстракции левомицетина составила 99,98 %. Результаты анализа представлены в таблице 2.

С целью сравнения эффективности извлечения хлорамфеникола из мясных продуктов различными способами дополнительно проведены исследования по определению хлорамфеникола из продуктов животного происхождения согласно действующим методическим указаниям МУК 4.1.1912-04 «Определение остаточных количеств левомицетина (хлорамфеникола, хлормицетина) в продуктах животного происхождения методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и иммуноферментного анализа».

10 г мясного фарша, с заданным содержанием левомицетина, гомогенизировали с 15см3 фосфатного буфера (0,025 М КН2Р04 + 0,025 М Na2НР04) рН = 6,88 и экстрагировали 3 раза по 30 см3 этилацетата. Полученную взвесь центрифугировали 15 мин при 4000 об./мин и декантировали этилацетатный слой, промывали последовательно 5 см3 насыщенного раствора NaС1 с добавлением 0,2 мл 10 %-ного NaОН; 5 мл насыщенного раствора NaС1 с добавлением 0,2 мл 10 %-ного СН3СООН и 5 см3 насыщенного раствора NaС1. Органический слой отбирали и упаривали на ротационном испарителе (при 50 °С) до возможно минимального объема, отдували азотом до исчезновения запаха органических растворителей, добавляли 3 см3 смеси ацетонитрил:вода (1:4) и экстрагировали 3 раза 5 см3 петролейного эфира, петролейный эфир отбрасывали и извлекали хлорамфеникол экстракцией этилацетатом (3 раза по 5 см3). Этилацетатный слой упаривали досуха, растворяли в 0,1 см3 метанола и анализировали аликвотное количество раствора. Степень экстракции хлорамфеникола из образцов мяса составила 56,4 %.

Результаты исследований по определению эффективности извлечения хлорамфеникола методом жидкостной экстракции, твердофазной экстракции с насыпным сорбентом и по методическим указаниям МУК 4.1.1912-04 приведены в таблице 2.

Нужна помощь в написании статьи?

Мы - биржа профессиональных авторов (преподавателей и доцентов вузов). Пишем статьи РИНЦ, ВАК, Scopus. Помогаем в публикации. Правки вносим бесплатно.

Заказать статью

Таблица 1.

Сравнение эффективности способов извлечения хлорамфеникола из мясной матрицы

При сравнении полученных результатов установлено, что оптимальным способом экстракции хлорамфеникола из мясных продуктов является жидкостная экстракция с использованием в качестве растворителя-экстрагента этилацетата с последующей очисткой экстракта гексаном. В данном случае достигнута 100 %-ная экстракция хлорамфеникола с учетом матричного эффекта.

Таким образом, в ходе проведенных экспериментальных исследований отработан оптимальный способ подготовки проб мяса к анализу для определения левомицетина методом ВЭЖХ/МС, заключающийся в извлечении левомицетина из мяса жидкостной экстракцией этилацетатом и очисткой экстракта гексаном. Способ характеризуется высокой степенью извлечения, экспрессностью и простотой выполнения. Данный способ пробоподготовки может быть использован при разработке метода определения левомицетина в мясных продуктах.

Список литературы:

1.Онищенко Г.Г. Руководство «Контроль содержания химических соединений и элементов в биологических средах» / Н.В. Зайцева, Т.С. Уланова Пермь: Книжный формат, 2011. — 520 с.

2.Leo M.L. Nollet. Analysis of endocrine disrupting compounds in food. Blackkwell Publishing Ltd, 2001. — 491 p.

Средняя оценка 0 / 5. Количество оценок: 0

Поставьте оценку первым.

Сожалеем, что вы поставили низкую оценку!

Позвольте нам стать лучше!

Расскажите, как нам стать лучше?

1203

Закажите такую же работу

Не отобразилась форма расчета стоимости? Переходи по ссылке

Не отобразилась форма расчета стоимости? Переходи по ссылке