ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ. 3
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.. 4
1.1 Электрофорез. 4
1.1.1.Техника проведения. 5
1.2. Полимеразная цепная реакция. 7
1.2.1.Специфичность и применение. 7
1.2.2.Проведение ПЦР. 9
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.. 9
2.1. Метод Электрофореза. 9
2.1.1.Материалы.. 9
2.1.2.Методика. 10
2.2 Метод ПЦР. 11
Нужна помощь в написании реферата?
Мы - биржа профессиональных авторов (преподавателей и доцентов вузов). Наша система гарантирует сдачу работы к сроку без плагиата. Правки вносим бесплатно.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ. 14
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.. 15
ВВЕДЕНИЕ
Завершение полной расшифровки последовательности генома человека привело к возникновению новой области науки — системной биологии. В основе системной биологии лежит моделирование поведения сложных биологических процессов с целью предсказания их дальнейшего поведения.[[1]]
Одним из таких фундаментальных процессов является функционирование живой клетки. Согласно современным представлениям, наиболее адекватным описанием таких процессов являются функциональные сети — модели ансамблей взаимодействующих молекул. Для описания процесса функционирования различных генов в клетке используют генетические сети. Упрощенно генную сеть можно представить в виде многочисленных молекул, которые взаимодействуют друг с другом, обеспечивая, в конечном счете, контроль активности структурных генов и тем самым формирование признаков организма.[1]
Для описания биохимических реакций, происходящих в клетке, используют модели метаболических сетей. Особенностью этих моделей является их сложность, которая может быть описана в иерархическом виде. На нижних уровнях иерархии находятся генетические макромолекулы — ДНК, РНК и белки, а взаимодействия между ними определяют структуру функциональных сетей. Полное и адекватное исследование функций генома невозможно без детального исследования всех уровней его иерархии. Таким образом, в постгеномную эру на передний план выдвигаются задачи определения структур генетических макромолекул, их функций, а также взаимодействий с другими участниками генных и метаболических сетей.[1]
Такие методы как электрофорез (ЭФ) и Полимеразная цепная реакция (ПЦР) составляют первые этапы в исследованиях генетической информации и различных белковых молекул. Т.к. ПЦР — экспериментальный метод молекулярной биологии, позволяющий добиться значительного увеличения малых концентраций определённых фрагментов нуклеиновой кислоты (ДНК) в биологическом материале (пробе), а ЭФ — это аналитический метод, применяемый для разделения фрагментов ДНК по размеру (длине) и форме (в случае, если ДНК образует вторичные структуры, например шпильки).[1]
Целью нашего занятия стало – освоение методов работы с генетическим материалом. Из выше поставленной цели следуют следующие задачи: 1. Составить обзор литературы
2. Отработка методов Электрофореза и ПЦР ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Электрофорез
Электрофорез – метод разделения макромолекул, различающихся по таким параметрам, как размеры (или молекулярная масса), пространственная конфигурация, вторичная структура и электрический заряд.[[2]]
Результатом проведения электрофореза является электрофореграмма -картина, полученная после разделения сложной смеси с помощью электрофореза и специфического проявления. Электрофореграмма белков биологических жидкостей человека (сыворотка крови, моча, спинномозговая жидкость и др.) позволяет врачам получить значительную диагностическую информацию.[2]
Например, у здорового человека относительное содержание белковых фракций при определении их в сыворотке крови методом электрофореза на бумаге, следующее:
альбумины- 55-65%,
α1-глобулины 3-6%,
α2-глобулины 7-10%,
β-глобулины — 7-12%,
γ-глобулины — 13-19%.
При многих заболеваниях наблюдается изменение соотношения фракций, тогда как общее количество белка обычно мало изменяется. Выявление этих изменений с помощью метода электрофореза широко используется в диагностических целях. [2]
Электрофореграммы белков-ферментов (зимограммы) позволяют изучать изменения активности и изоферментного спектра таких белков под действием внешних и внутренних факторов как у человека, так и у других организмов. [2]
Преимущества:
1. Не требуется сложного оборудования
2. Низкая стоимость реактивов
Недостатки:
1. Высокий риск контаминации (загрязнения продуктами предыдущих ПЦР)
2. Требуется дополнительное помещение и персонал для стадии детекции продукта
3. Трудоемкость
4. Только качественный анализ (есть/нет)
Электрофорез ДНК — это аналитический метод, применяемый для разделения фрагментов ДНК по размеру (длине) и форме (в случае, если ДНК образует вторичные структуры, например шпильки). Силы электрического поля, прикладываемого к образцам, заставляют фрагменты ДНК мигрировать через гель. Сахарофосфатный остов молекул ДНК заряжен отрицательно и поэтому цепи ДНК двигаются от катода, заряженного отрицательно, к положительному аноду. Более длинные молекулы мигрируют медленнее, так как задерживаются в геле, более короткие молекулы двигаются быстрее.[[3]]
Нужна помощь в написании реферата?
Мы - биржа профессиональных авторов (преподавателей и доцентов вузов). Наша система гарантирует сдачу работы к сроку без плагиата. Правки вносим бесплатно.
К образцам обычно добавляют низкомолекулярный кислый краситель (например, динитрофенол, бромфеноловый синий), чтобы визуализировать ход электрофореза в процессе. Краситель также необходим для того, чтобы определить, когда стоит остановить процесс.[3]
Электрофорез проводится в камере, заполненной буферным раствором. Чаще всего используются буферы, содержащие ЭДТА, трис и борную кислоту: TAE и TBE. Буфер необходим для повышения ионной силы раствора, в котором будет происходить разделение молекул ДНК под действием приложенного электрического поля.[3]
После разделения (иногда краситель вносят в расплавленную агарозу) фрагменты ДНК разной длины визуализируют при помощи флюоресцентных красителей, специфично взаимодействующих с ДНК, например, агарозные гели обычно красят бромистым этидием, который интеркалирует между азотистыми основаниями дуплекса и флюоресцирует в УФ-лучах.[3]
Определение размеров производят путем сравнения коммерчески доступных фрагментов ДНК (DNA ladder, «линейка»), содержащий линейные фрагменты ДНК известной длины.[3]
Для электрофоретического анализа ДНК обычно используют агарозные (для относительно длинных молекул ДНК) и полиакриламидные (для высокого разрешения коротких молекул ДНК, например, в случае секвенирования) гели.[3] 1.1.1.Техника проведения
«Методика электрофореза с использованием агарозного геля должна учитывать, что «поры» для разделения макромолекул большого размера, и потому подходят только для молекул, молекулярная масса которых не меньше 200 кДа. К преимуществам агарозных гелей можно отнести относительно быстрое перемещение молекул, но полосы имеют ограниченное разрешение, так как склоны к быстрому размытию границ и распространению в разные стороны. Процедура электрофореза с гелем проводиться по следующим этапам:[[4]]
- Во-первых, приготовление водного раствора, вид которого зависит от выбора электрофоретического буфера (например, трис – ацетатный, трис – фосфатный, трис – боратный). Конечная рН водного раствора должна составлять 8,0; Одновременно с приготовлением водного раствора выбранный буфер при помощи нагревания готовит расплав агарозы с концентрацией 0,4 – 2,0 %; Полученный расплав агарозы остужают до 50 градусов, после чего в него добавляют краситель – бромистый этидий в концентрации, которая требуется для дальнейшей визуализации дифференцированных молекул во время ультрафиолетового излучения. Длина волны УФ – света должна составлять 254 нм; В горизонтальную кювету помещается 50-ти градусный расплав агарозы, где в последующем за счет гребенки образуются углубления для внесения препаратов ДНК. В подобном состоянии расплав агарозы оставляется до момента достижения консистенции геля; После застывания гелеобразных лунок с добавленными препаратами ДНК, кювету помещают в электрофоретическую ванну; Одновременно приготавливается навеска гексилрезорцина, который включается в электрофоретический буфер до момента достижения высшей концентрации, составляющей 10-3 М (0,194 г/л). Именно гексилрезорцин или С6 – алкилоксибензол проявляет наиболее выраженные фотопротекторные свойства; Буфер с содержанием указанного выше количества и концентрации С6 – алкилоксибензола, погружается также на на электрофоретическую ванну; Электрофоретическая ванна соединяется с источником света, на котором заранее установлены показатели режимов электрофореза; Источник тока отключается только после прошествии некоторого времени от разделения препаратов ДНК, что определяется получением частиц с разными характеристиками. После разделении молекул ДНК и отключения источника тока гелеобразную массу агарозы переносят на трансиллюминатор; На поверхности трансиллюминатора под воздействием УФ – излучения происходит детализации полученного разделения молекул ДНК, и создание документов при помощи цифровых устройств; Последним, заключающим этапом является, вырезание участка геля из агарозы с разделенным молкулами ДНК, для проведения последующих генно – инженерных исследований.»[4]
1.2. Полимеразная цепная реакция
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — метод, имитирующий естественную репликацию ДНК, «invitro» аналог биохимической реакции синтеза ДНК в клетке. ПЦР позволяет найти в исследуемом материале небольшой участок генетической информации, заключенный в специфической последовательности нуклеотидов ДНК любого организма среди огромного количества других участков ДНК и многократно размножить его. ПЦР позволяет получить количество ДНК, достаточное для детекции.
Область применения:
· диагностика инфекционных заболеваний;
· диагностика онкологических заболеваний;
· диагностика генетических заболеваний;
· идентификация личности;
· диагностика патогенов в пище;
· диагностика ГМО и др. 1.2.1.Специфичность и применение.
Нужна помощь в написании реферата?
Мы - биржа профессиональных авторов (преподавателей и доцентов вузов). Наша система гарантирует сдачу работы к сроку без плагиата. Правки вносим бесплатно.
ПЦР — метод молекулярной диагностики, ставший для ряда инфекций «золотым стандартом», проверен временем и тщательно апробирован клинически. Метод ПЦР позволяет определить наличие возбудителя заболевания, даже если в пробе присутствует всего несколько молекул ДНК возбудителя.[[5]]
ПЦР позволяет диагностировать наличие долго растущих возбудителей, не прибегая к трудоёмким микробиологическим методам, что особенно актуально в гинекологии и урологии при диагностике урогенитальных инфекций, передающихся половым путем (ИППП).[5]
Также, этим методом проводят диагностику вирусных инфекций, таких как гепатиты, ВИЧ и др. Чувствительность метода значительно превосходит таковую у иммунохомических и микробиологических методов, а принцип метода позволяет диагностировать наличие инфекций со значительной антигенной изменчивостью.[5]
Специфичность ПЦР при использовании технологии PCR даже для всех вирусных, хламидийных, микоплазменных, уреаплазменных и большинства других бактериальных инфекций достигает 100%. Метод ПЦР позволяет выявлять даже единичные клетки бактерий или вирусов. ПЦР-диагностика обнаруживает наличие возбудителей инфекционных заболеваний в тех случаях, когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими, микроскопическими) это сделать невозможно.[5]
Особенно эффективен метод ПЦР для диагностики трудно культивируемых, некультивируемых и скрыто существующих форм микроорганизмов, с которыми часто приходится сталкиваться при латентных и хронических инфекциях, поскольку этот метод позволяет избежать сложностей, связанных с выращиванием таких микроорганизмов в лабораторных условиях.[5]
Применение ПЦР-диагностики также очень эффективно в отношении возбудителей с высокой антигенной изменчивостью и внутриклеточных паразитов. Методом ПЦР возможно выявление возбудителей не только в клиническом материале, полученном от больного, но и в материале, получаемом из объектов внешней среды (вода, почва и т. д.). В урологической и гинекологической практике — для выявления хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, герпеса, гарднереллёза, микоплазменной инфекции, ВПЧ — вирусов папилломы человека; в пульмонологии — для дифференциальной диагностики вирусных и бактериальных пневмоний, туберкулёза; в гастроэнтерологии — для выявления хеликобактериоза; в клинике инфекционных заболеваний — в качестве экспресс-метода диагностики сальмонеллёза, дифтерии, вирусных гепатитов В, С и G; в гематологии — для выявления цитомегаловирусной инфекции, онковирусов.
Специфичность ПЦР основана на образовании комплементарных комплексов между матрицей и праймерами — короткими синтетическими олигонуклеотидами длиной 18 — 30 букв. Каждый из праймеров сопоставим (комплементарен) с одной из цепей двуцепочечной матрицы, обрамляя начало и конец амплифицируемого участка. После соединения (гибридизации) матрицы с праймером (отжиг), последний служит затравкой для ДНК-полимеразы при синтезе комплементарной цепи матрицы.[5] 1.2.2.Проведение ПЦР
Для проведения ПЦР в простейшем случае требуются следующие компоненты:
· ДНК-матрица, содержащая тот участок ДНК, который требуется амплифицировать;
· два праймера, комплементарные концам требуемого фрагмента;
· термостабильная ДНК-полимераза;
· дезоксинуклеотидтрифосфаты (A, G, C, T);
· ионы Mg2+, необходимые для работы полимеразы;
· буферный раствор.
Нужна помощь в написании реферата?
Мы - биржа профессиональных авторов (преподавателей и доцентов вузов). Наша система гарантирует сдачу работы к сроку без плагиата. Правки вносим бесплатно.
ПЦР проводят в амплификаторе — приборе, обеспечивающем периодическое охлаждение и нагревание пробирок, обычно с точностью не менее 0,1°C. Чтобы избежать испарения реакционной смеси, в пробирку добавляют высококипящее масло, например, вазелиновое. Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции.[5] МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ 2.1. Метод Электрофореза 2.1.1.Материалы
· «образец ДНК — молекулыднккоторые нужно разделить либо определить их размер, объем 10-20 мкл
· электрофорезная камера . Камеру можно купить , но можно и сделать самому.Камера — это просто герметично склеенная коробочка из оргстекла с 2-я штекерами в которые вставляется питание, самое проблематичное здесь — это подобрать блок питания.
· Источник питания на 50 — 150 В
· Гель — готовый или сделанный самостоятельно Для приготовления 1% геля: 100 мл воды и 1 грамм агарозы
· буфер TAE(Tris-acetate-EDTA), который в разбавленном виде заливается в камеру, объем в зависимости от размеров камеры
· Loadingbuffer — обычно глицерин, объем 1 мкл
При нанесении в лунки днк ,она сама по себе туда не опуститься, всплывет и рассеится по буферу. Чтобы этого не произошло и нужен глицерин или чтонибудьдругое тяжелое.
· Loadingdye — краситель , объем 1 мкл
Не обязателен, но позволяет визуально наблюдать за ходом электрофореза ( днк он конечно не покажет )
· DNA ladder — маркер, по объему — столько же сколько и образца
Необходим для определения размера образца.Маркер — фрагменты ДНК , определенного размера.
Бывают разныеDnaLadder 100 , 50 , 25. DnaLadder 100 — набор фрагментов от 100 нуклеотидов до 1000 с шагом в 100. Обычно наносятся в первую лунку и получаются в виде лесенки. Если нужно только узнать наличиеотсутствие днк в образце , то можно и без маркера. В маркер не нужно добавлять ни Loadingbuffer ни Loadingdye.
· Трансиллюминатор или ультрафиолетовая лампа(например бытовая люминесцентная черная)Для визуализации подкрашенной этидиумом ДНК.»[[6]] 2.1.2.Методика
«1. Готовят 1 х ТБЭ в объеме, достаточном для заполнения камеры для электрофореза и приготовления геля.
2.Добавляют к 1 х ТБЭ агарозу в количестве, необходимом для получения 0,35—0,45% (в/о) раствора, и нагревают в микроволновой печи до полного расплавления агарозы.
3. Охлаждают смесь до +/- 50 °С.
4.Добавляют к раствору агарозы бромистый этидий до конечной концентрации 0,5 мкг/мл и осторожно перемешивают, избегая появления в геле пузырьков воздуха.
5. Теплую агарозу выливают в кювету для геля и равномерно распределяют ее по кювете. Вертикально вставляют гребенку так, чтобы ее зубцы не доставали до дна примерно 1,5 мм.
6. Оставляют кювету с агарозным гелем на 30 мин, затем осторожно удаляют гребенку и липкую ленту. Кювету с гелем помещают в электрофорезную камеру, содержащую необходимое количество 1 х ТБЭ с бромистым этидием в конечной концентрации 0,5 мкг/мл.
7. Подготавливают к электрофорезу образцы исследуемой и маркерной ДНК, для чего смешивают их с буфером для нанесения (5:1, о/о). Чтобы получить четкий сигнал при окрашивании бромистым этидием-EtBr, в лунку шириной 5 мм достаточно внести 200 нг маркерной ДНК. Для построения стандартной кривой необходимо использовать маркерные фрагменты, длина которых примерно равна длине исследуемой ДНК.
(EtBr при форезе движется от (+) к (-). Если хочется, чтобы он не уходил из геля, лучше ввести его и в форезный буфер.)
8. Осторожно вносят в лунки исследуемую и маркерную ДНК.для повышения точности определения размера маркерную ДНК наносят по обе стороны от исследуемой.
9. Проводят электрофорез при градиенте напряженности 1—3 В на 1 см геля в течение 1—3 ч.
10. Просматривают гель в УФ-свете на транс иллюминаторе и фотографируют.»[[7]] 2.2 Метод ПЦР
«1. ВЗЯТИЕ, ПРЕДВАРИТЕЛЬНАЯ ОБРАБОТКА, ДОСТАВКА и ХРАНЕНИЕ МАТЕРИАЛА
1.1. Исследуемый материал (мокрота, плевральная жидкость, моча, бронхоальвеолярный лаваж, промывные воды бронхов и др.экссудаты) в количеств 10 мл собрать в пластиковую центрифужную пробирку объемом 50 мл с плотно завинчивающейся крышкой.
1.1.2. Для разжижения мокроты или плевральной жидкости :
1.1.2.1. Приготовить смесь NALC следующего состава ( на 5 проб мокроты):
0.25 г ацетил-цистеина, 25 мл 4% NaOH, 25 мл 0.1М триNa цитрата Смесь готовят в день использования (раствор не хранится).
1.1.2.2. К образцу в пробирке добавить равный объем NALC, перемешать на вортексе в течение 5-20 секунд, инкубировать 15 минут при комнатной температуре, а затем развести 0.067М фосфатным буфером (рН 6.8) до 50 мл;
1.2. Центрифугировать 15 минут при 3000 об/мин, удалить надосадочный раствор вакуумным аспиратором в колбу-ловушку с дез.раствором. Осадок использовать для выделения ДНК.
1.3. К осадку в пробирке добавить 100 мкл дистиллированной воды, пробирку плотно закрыть, перемешать на вортексе, и перенести весь объем суспензии в чистую полипропиленовую пробирку типа Эппендорфф объемом 1,5 мл.
Неохлажденные обработанные образцы использовать в течение 2-х часов для выделения ДНК. Допускается хранение при +4…+8оС не более 1 суток, при –18…-20оС—не более 2-х недель.
Доставка обработанных проб в лабораторию должна проводиться в термосе со льдом или в термоконтейнере в течение 12 часов.
2. ВЫДЕЛЕНИЕ ДНК ИЗ БИОПРОБ
2.1. Пробы (осадок в 100 мкл воды) прогреть 20 мин при температуре 95оС.
2.2. К пробе добавить 300 мкл раствора I и 20 мкл суспензии сорбента. Суспензию сорбента перед использованием необходимо тщательно перемешать до полной гомогенности.) Пробирки плотно закрыть.
2.3. Пробы инкубировать в течение 10 минут при комнатной температуре, 1-2 раза перемешивая на вортексе.
2.4. Центрифугировать в течение 15 сек на микроцентрифуге при 8-12 тыс.об/мин., супернатант удалить вакуумным аспиратором в колбу-ловушку, с использованием одноразовых наконечников,.
2.5. К осадку добавить 100 мкл раствора II, пробирки плотно закрыть и встряхнуть на вортексе. Сорбент осадить центрифугированием при 8-12 тыс.об/мин. в течение 15 секунд. Супернатант удалить вакуумным аспиратором в колбу-ловушку.
2.6. Процедуру отмывки (добавление раствора, встряхивание на вортексе и осаждение центрифугированием) повторить еще два раза с использованием 1.0 мл раствора III для промывки.
2.7. Дополнительным центрифугированием при 8-12 тыс.об.мин., с последующим отбрасыванием супернатанта убрать остатки раствора III.
2.8. Пробирки поместить в твердотельный термостат и подсушить пробы 5 мин при температуре 45-55оС, оставляя пробирки открытыми.
Внимание! На всех стадиях обработки клинического материала удаление супернатанта производят одноразовыми пластиковыми наконечниками при помощи вакуумного аспиратора в колбу-ловушку, содержащую дезинфицирующий раствор (3% хлорамин или 5% перекись водорода и т.п.)
2.9. В пробирки с сорбентом добавить 50 мкл ТЕ буфера, пробирки плотно закрыть, перемешать на вортексе и инкубировать в течение 5 минут при 45-55оС в твердотельном термостате.
2.10. Пробирки центрифугировать 15 сек при 8-12 тыс.об/мин, водную фазу (супернатант) использовать в качестве исследуемого образца ДНК для постановки реакции амплификации.
Нужна помощь в написании реферата?
Мы - биржа профессиональных авторов (преподавателей и доцентов вузов). Наша система гарантирует сдачу работы к сроку без плагиата. Правки вносим бесплатно.
Раствор ДНК (супернатант, перенесенный с осадка сорбента в чистую пробирку), можно хранить при температуре +4…+8оС в течение недели или при температуре -20оС в течение 6 месяцев.
3. ПРОВЕДЕНИЕ ПЦР (амплификация)
3.1. Приготовить и пронумеровать пробирки для проведения амплификации вместимостью 0,5 мл (или 0,2 мл) в соответствии с количеством анализируемых проб. Подготовить и промаркировать пробирки для положительного (маркировка «К+») и отрицательного (маркировка «К-») контрольных образцов.
3.2. За 20-30 минут до приготовления рабочей амплификационной смеси извлечь комплект реагентов для ПЦР (амплификации) из морозильника, разморозить содержимое (желательно поместить пробирку с Taq-полимеразой в ледяную баню). Пробирки с реакционной смесью и полностью размороженным раствором разбавителя тщательно
встряхнуть для перемешивания содержимого.
3.3. Из компонентов набора приготовить смесь реагентов для амплификации из расчета на 1 пробу:
Рекомендуется готовить смесь реагентов не менее чем на 5 реакций для достоверной дозировки объема фермента17,5 мкл разбавителя, 2,5 мкл реакционной смеси, 0,2 мклTaq-полимеразы
При приготовлении рабочей амплификационной смеси необходимо все компоненты добавлять отдельными наконечниками.
3.4. После добавления Taq-полимеразы, которое производится в последнюю очередь, необходимо тщательно перемешать смесь пипетированием.
3.5. Добавить по 20 мкл рабочей амплификационной смеси во все пробирки, подготовленные для амплификации.
3.6. Добавить во все пробирки по 1 капле (около 25 мкл) минерального масла.
3.7. Внести 5 мкл образца из обработанной анализируемой пробы (см п. выделение ДНК) в соответствующую пробирку с рабочей амплификационной смесью под слой масла.
3.8. Внести в пробирки для положительных контрольных образцов по 5 мкл положительного контрольного образца ДНК, а в пробирку для отрицательного контрольного образца – 5 мкл разбавителя , используя индивидуальные наконечники с фильтрами.
3.9. Пробирки закрыть и центрифугировать в течение 3-5 секунд при 1,5– 3000 об/мин при
комнатной температуре (+18…+25оС) на микроцентрифуге-вортексе.
3.10. Перенести пробирки в прогретый до температуры +93оС (установившаяся температура в режиме Пауза) программируемый термостат (амплификатор) и провести амплификацию по
следующей программе:»[[8]]
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
По окончания занятий по большому практикуму были выполнены следующие задачи:
1. Проанализирована научная литература.
2. Отработаны методы Электрофореза и ПЦР
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
[1] Колчанов Н. Перспективные исследования генетических макромолекул [Электронный ресурс]. Режим доступа: #»#_ednref2″ name=»_edn2″ title=»»>[2]Стручкова И.В.; Кальясова Е.А. Теоретические и практические основы проведения электрофореза белков в полиакриламидном геле // И.В. Стручкова Е.А. Кальясова – 2012 С6
[3] Обнаружение единичных нуклеотидных замен в ДНК: расщепление РНКазой и денатурирующий градиентный гель-электрофорез [Электронный ресурс]. Режим доступа: #»#_ednref4″ name=»_edn4″ title=»»>[4] Электрофорез и генетика [Электронный ресурс]. Режим доступа: #»#_ednref5″ name=»_edn5″ title=»»>[5] Полимеразная цепная реакция [Электронный ресурс]. Режим доступа: https://www.invitro.ru/for-clients/mat/1133/(Дата обращения) 18.11.14
[6] Электрофорез ДНК в агарозном геле [Электронный ресурс]. Режим доступа: #»#_ednref7″ name=»_edn7″ title=»»>[7] Гель-электрофорез ДНК [Электронный ресурс]. Режим доступа: #»#_ednref8″ name=»_edn8″ title=»»>[8] МЕТОДИКА проведения исследования клинического материала на наличие ДНК микобактерий туберкулезного комплекса методом ПЦР. ОО НПФ «Литех»