Однако для того, чтобы предлагаемая методика заняла заслуженное место в системе обеспечения качества лекарственных средств, гарантируя достоверные и точные результаты анализа, дополнительно необходимо провести процедуру ее валидации.Валидация дает понимание сути методики, осознание необходимости строгого соблюдения ее параметров, позволяет выявить недостатки и внести соответствующие коррективы на ранних стадиях разработки, что позволяет значительно снизить вероятность ошибок [1; 5].
В связи с этим, целью данной работы явилось изучение степени пригодности предлагаемой методики прямого спектрофотометрического определения суммы фенолокислот в траве хвоща лесного.
Материалы и методы
Объектами исследования являлись образцы надземной травы хвоща лесного. Отбор проб для анализа, изучение характеристик подлинности и показателей качества осуществляли, руководствуясь общими статьями Государственной Фармакопеи XI издания [4].
Количественное определение фенолокислот проводили методом прямого спектрофотометрического определения. При этом принятое опорное значение содержания фенолокислот в пересчете на кофейную кислоту в траве хвоща лесного составило 0,252 ± 0,002 %.
Валидация методики проведена по прецизионности (повторяемость), воспроизводимости (лабораторная и межлабораторная), правильности и линейности [3; 5]. Статистическую обработку результатов выполняли с помощью пакета прикладных программ «StatisticaforWindows 8.0».
Результаты исследования
Повторяемость методики определяли в условиях, при которых шесть независимых результатов измерений получали одним методом, в одной лаборатории, одним лаборантом-исследователем, с использованием одного спектрофотометра, в пределах короткого промежутка времени. Статистическая обработка полученных результатов, показала, что они достоверны при доверительной вероятности 95 %, вычисленные значения величины относительного стандартного отклонения (RSD) — 2,37 % и относительного доверительного интервала среднего значения — 2,10 % не превышают критериев приемлемости — 5 %, что свидетельствует о прецизионности методики в условиях повторяемости (табл.1).
Таблица 1.
Результаты оценки повторяемости методики
Примечание: f —число степеней свободы, Хср — среднее выборки,
S² — дисперсия, S — стандартное отклонение, Sх— стандартное отклонение среднего результата (стандартная ошибка), SR—относительное стандартное отклонение расчетной величины, Р —доверительная вероятность, t — критерий Стьюдента
Воспроизводимость методики определяли на идентичных образцах сырья совместным оценочным экспериментом в трех различных лабораториях СибГМУ на различных приборах, разными лаборантами-исследователями по 3 испытания образца на 3-х разных уровнях концентраций в интервале 80—120 % от принятого опорного значения (табл. 2). Статистическое тестирование выбросов проводили с использованием критерия Кохрена, дисперсии и стандартного отклонения для каждого уровня и рассчитывали по ГОСТ Р ИСО [3]. При рассмотрении данных, не обнаружив, какой либо зависимости, в качестве показателей прецизионности, нами были выбраны средние значения стандартных отклонений. Данные значения стандартных отклонений могут быть применены в диапазоне содержания фенолокислот 0,020 до 0,040 по массе. Меры прецизионности для данного метода измерений не превышают критериев приемлемости как для внутрилабораторной прецизионности 1,86 % < 5 %, так и для межлабораторной прецизионности 4,05 % < 10 %, что указывает на удовлетворительную воспроизводимость методики.
Таблица 2.
Результаты оценки воспроизводимости методики
Примечание: ФК — фенолокислоты, Хср — среднее выборки,
S² — дисперсия, S —стандартное отклонение, Sх — стандартное отклонение среднего результата (стандартная ошибка), SR— относительное стандартное отклонение расчетной величины, Р —доверительная вероятность, t — критерий Стьюдента.
Правильность методики устанавливали на идентичных образцах травы хвоща лесного с добавлением известного количества рабочего стандартного образца кофейной кислоты по 3 испытания образца на 3-х уровнях концентраций (табл. 3). Критерий приемлемости — средний процент восстановления при использовании растворов заданных концентраций, скорректированный на 100 %, средняя величина которого должна находиться в пределах 100 ± 5 %. В разработанной методике процент восстановления находился в пределах от 96,72 % до 103,09 %, его средняя величина составила 99,41 %.
Таблица 3.
Результаты определения правильности методики
Линейность аналитической методики определяли на 5-ти уровнях концентраций от принятого опорного значения расчетной величины (0,25 %). В ходе определения линейности установлено, что график зависимости имеет линейный характер в области концентрации суммы фенолокислот, значение остаточного стандартного отклонения равно 0,311, коэффициент корреляции близок к единице (0,999), это свидетельствует о сильной линейной зависимости значения оптической плотности от содержания действующих веществ.
Заключение
Проведена валидация методики прямого спектрофотометрического определения фенолокислот в траве хвоща лесного по прецизионности и воспроизводимости, правильности и линейности. Полученные резуль-таты позволяют сделать заключение о том, что предлагаемая методика является высокочувствительной, правильной и воспроизводимой.
Список литературы:
Аладышева Ж.И., Беляев В.В., Береговых В.В. Практические аспекты работ по валидации аналитических методик // Фармация. — 2008. — № 7. — С. 9—14.
Бондарчук Р.А., Н.Э. Коломиец Исследование фенольных соединений хвоща лесного Equisetum sylvaticum L. // Бюллетень сибирской медицины. — 2011. — № 5. — С. 25—29.
Нужна помощь в написании статьи?
Мы - биржа профессиональных авторов (преподавателей и доцентов вузов). Пишем статьи РИНЦ, ВАК, Scopus. Помогаем в публикации. Правки вносим бесплатно.
ГОСТ Р ИСО 5725-2-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 2. Основной метод определения повторяемости и воспроизводимости стандартного метода измерений. М.: ИПК Издательство стандартов. — 2002. — 42 с.
Государственная фармакопея СССР. Вып. 1. Общие методы анализа. / МЗ СССР. — 11-е изд., доп. — М: Медицина, 1987. — 335 с.
Руководство ICH Валидация аналитических методик. Содержание и методология» Q2(R1); Официальные документы // Фармация. — 2008. — № 4. — С. 7—10.